肉苁蓉提取物D

肉苁蓉(学名:CistanchedeserticolaMa),别名疆芸、寸芸、苁蓉、查干告亚(蒙语),属濒危种。高大草本,高40-厘米,大部分地下生。花期5-6月,果期6-8月。主产于新疆、内蒙古阿拉善盟,甘肃、宁夏也有分布。

肉苁蓉是一种寄生在沙漠树木梭梭根部的寄生植物,从梭梭寄主中吸取养分及水分。素有“沙漠人参”之美誉,具有极高的药用价值,是中国传统的名贵中药材。肉苁蓉在历史上就被西域各国作为上贡朝廷的珍品,也是历代补肾壮阳类处方中使用频度最高的补益药物之一。

肉苁蓉又名金笋、地精、苁蓉、大云,为列当科植物肉苁蓉CistanchedeserticolaY.C.Ma的干燥带磷叶的肉质茎。主产于内蒙古,甘肃、新疆、青海等地,是我国宝贵的要用重要之一,且在滋补配方中仅次于人参居第二位,有“沙漠人参”的美誉。肉苁蓉具有抗衰老、抗氧化和促进创伤愈合、促进成纤维细胞生长的功效,主要有有效成分为肉苁蓉多糖。

利用多巴胺自氧化产生超氧自由基试验肉苁蓉多糖对超氧自由基的清除能力。

干燥带刻度试管依次加入0.1mmol/LpH=10.12碳酸盐缓冲液3.0mL、水3.0mL、不同浓度的多糖样品溶液0.5mL,置于30℃水浴中预热5min后,加入在30℃水浴中预热过的2.0mmol/L多巴胺1.0mL,立即混匀计时,30℃保温反应5min,立即用2滴10mol/LHCl中止反应。用缓冲液作参比,在nm处测吸光度(A样),空白组以0.5mL水代替样品(A空白),对照组以0.5mL抗坏血酸代替样品,每一样品平行测3次,取平均值。

超氧自由基清除率(%)=(A空白-A样)/A空白×%

超氧自由基的化学性质活泼,能使生物膜上的脂肪酸产生过氧化物,进而破坏细胞。结果表明,肉苁蓉多糖可以抑制多巴胺自氧化产生的超氧自由基,并且在测定的浓度范围内随着浓度的增大效果递增,但能力低于抗坏血酸。

取0.1mL的肉苁蓉多糖溶液加入5.0mLDPPH°溶液中,迅速混匀,室温下静置10min后,测定其在nm波长的吸光度变化。每一样品平行测3次,取其平均值。样品对DPPH°清除率(%)=1-[(A-B)/A0]×%A0——未加样DPPH°(1.9mLDPPH°+0.1mL50%乙醇)的吸光度值;A——样品与DPPH°反应后的吸光度值;B——空白样品(样品0.1mL+1.9mL50%乙醇)的吸光度值。

DPPH°(二苯代苦味肼基自由基)是一种稳定的自由基,在有机溶剂中呈紫色,在nm附近有强吸收。加入抗氧剂后,一部分自由基被清除,使吸收减弱,可借此来评价该物质的抗氧化活性。

实验结果表明,肉苁蓉多糖对DPPH°的清除能力与其浓度呈正相关,且清除能力大于抗坏血酸。

*引用王国卫,赵芳.新疆肉苁蓉多糖清除活性氧自由基[J].光谱实验室,,(03):-.

在无菌条件下取5个月正常胎儿肺组织,经生理盐水和抗生素(青霉素、链霉素、庆大霉素)漂洗后剪成1mm3以下的微笑组织块,贴附于培养瓶壁,于培养瓶中胶乳适量含10%小牛血清的MEM培养基,置37℃、含5%CO2孵育箱中培养,每周更换培养液2,3周后成纤维细胞张曼瓶壁,此时用1%胰蛋白酶消化,将获得的成纤维细胞进行传代培养,约1周传1代。用于本实验的细胞属第6代。将第6代传代成纤维细胞种植于24孔培养板中;每孔种植细胞个,分别加入MEM培养基1ml。一孔作为空白对照组,其他孔均为给药组,各组重复4孔,置于37℃含5%CO2孵育箱中培养6d,观察结果。

在组织创伤愈合过程中成纤维细胞起着十分重要的作用,它是结缔组织中功能活跃的细胞,能合成3种纤维和基质。空白对照组织细胞数量少,分布散在,细胞成长缓慢(图1),给药组随药物浓度改变细胞数量也发生变化,12.5ug/ml组细胞生长最旺盛,细胞数量多,排列紧密(图2)肉苁蓉多糖能明显促进体外成纤维细胞的生长,应用适当浓度的肉苁蓉多糖可促进创伤愈合。

*引用高慧,严华,张洪泉,童鲲.肉苁蓉多糖对人成纤维细胞的增殖作用[J].中成药,,(04):43-44.

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